支原体的分离培养鉴定

支原体的分离培养鉴定

溶脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)是常见的致病性泌尿道支原体。根据支原体不同生化反应特性和对特定物质的不同抵抗力可用于分离鉴定支原体。

【原理】标本分别接种于支原体鉴别培养液内。溶脲脲原体可产生脲酶，使分糖产氨，培养液呈碱性，指示剂由黄色变为粉红色。人型支原体能分解精氨酸产氮，使含有精氨酸肉汤培养液呈碱性而呈粉红色。

【材料】支原体分离鉴定培养液。

【标本采集】标本采集后应立即送检，室温保存不超过2小时，2—8℃保存不超过5小时。

男性：用男性无菌拭子插入尿道口内2—4cm处轻轻旋转取分泌物;也可取前列腺液或精液培养。必要时也可用尿液作支原体培养，取清晨第1次尿的中段尿10—20ml，经2000rpm离心10分钟，取沉渣接种，但尿液支原体培养阳性率明显低于尿道分泌物。

女性：用扩阴器扩阴后，用女性拭子在宫颈口内1—2cm处轻轻旋转取宫颈分泌物;也可用羊水培养。不推荐用尿液。

【培养】

1、培养管复温取出所需要数量的培养管，复温至室温，作好标记。

2、接种将拭子插入培养管，旋转并挤压数次，使拭子中支原体渗入液体中，拭子经灭菌处理后妥善处理;尿液沉渣、精液、羊水、前列腺液等液体标本取0.2ml接种培养液，充分混匀。

3、培养35—37℃恒温培养24—48h小时，观察结果。

【结果】 Uu应在24小时内报告，Mh应在48小时内报告，其他结果在48小时内报告，最长不超过72小时。培养管液体由橙色变红色，透明清亮，无明显浑浊，表明有Uu和(或)Mh生长，可判为阳性;培养管液体无任何变化，可报阴性结果;培养液明显浑浊变红者，应判无支原体生长。必要时可做支原体固体培养，低倍镜下观察有荷包蛋样菌落生长者为支原体阳性。

【注意事项】

1、Uu 、Mh生长应保持培养液透明清亮，无明显浑浊，偶遇浑浊者不得报支原体阳性。

2、Uu生长，培养液正常变色时间在24小时内，但如果标本含量少时，变色时间可能超过24小时。Mh生长，培养液正常变色时间在24—48小时之内，如果标本含量较大时，变色时间可能会小于24小时。

3、不能确定有无杂菌污染时，可将培养液取出少许接种于血平板或通过0.45um滤膜过滤培养，根据血平板菌落生长或过滤后培养的颜色变化来判断杂菌污染。