ELISA法由于本身所具备的优越性，是一项很有发展前途的血清学诊断方法，应用领域也越来越广泛。可我们认为ELISA不是万应良方。因为ELISA法还是有局限性，ELISA中变异因素多，对于要诊断某一疾病时，必须进行一系列实验室预试，摸索，或实验研究，常用竞争法测定血清的溶度。
在ELISA试剂盒实验血清为什么要稀释？有两个原因：
1）竞争抑制比较明显，应稀释竞争物；
2）血清中含有的性腺激素比较低，应该浓缩才对。
血清稀释用普通的PBS即可，可加1％的BSA，能有效降低ELISA本底，当然如果你嫌麻烦我觉得用生理盐水替代PBS关系也不大。不管你是用直接竞争还是间接竞争，血清的稀释倍数肯定要事先确定，但也不用一点点，你做一个预试验即可，选择OD在1.0左右的稀释倍数，即你的竞争ELISA中阴性孔OD在1.0，这样作出来的曲线比较敏感。
ELISA试剂盒实验稀释血清的步骤：
先把蛋白稀释一定的倍数，比如说10倍、20倍稀释（这样可以大体确定一个参数），将抗原进行一系列稀释包被微量反应板，再用一定稀释度的阳性参考血清和阴性参考血清进行孵育后洗涤，再加酶结合物进行反应，经孵育洗涤后，加底物溶液显色，终止反应后分别测定O.D值，选择O.D值≥1.0的那个抗原稀释度为最适包被浓度。一般总是要选择那个O.D值稍大于1.0，而不选择小于1.0的抗原浓度。阴性参考血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求阳性参考血清和阴性参考血清的O.D值有明显差别。