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elisa试剂盒白介素类操作步骤
人阅读 发布时间:2017-09-05 15:29
elisa试剂盒白介素类操作步骤
1.elisa试剂盒白介素类用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~十μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过液。次日洗刷3次。2.加必定稀释的待检样品(不知道抗体)0.1ml于上述已包被之反响孔中,置37℃孵育1小时,洗刷。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)
3.于反响孔中,参加新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗刷,最终一遍用DDW洗刷。
4.于各反响孔中参加暂时制造的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 十~30分钟
5.于各反响孔中参加2M硫酸0.05ml
6.elisa试剂盒白介素类可于白色布景上,直接用肉眼调查成果:反响孔内色彩越深,阳性程度越强,阴性反响为无色或极浅,根据所呈色彩的深浅,以“+"、“-"号表明。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则4十nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规则的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
7.加酶标抗体:于各反响孔中,参加新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗刷。
4.加底物液显色:于各反响孔中参加暂时制造的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 十~30分钟。
8.停止反响:于各反响孔中参加2M硫酸0.05ml。
9.成果断定:可于白色布景上,直接用肉眼调查成果:反响孔内色彩越深,阳性程度越强,阴性反响为无色或极浅,根据所呈色彩的深浅,以“+"、“-"号表明。也可测OD值:elisa试剂盒白介素类检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则4十nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规则的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。