包被抗原（ELISA）

对Elisa实验中所涉及到抗原包被的实验做一个步骤分析
工具/原料
抗原、PBST、96孔酶标板、HRP、血清、缓冲液
方法/步骤
1.用50mM的碳酸盐包被缓冲液 （ pH9.6） 溶解抗原， 使抗原浓度为10-20μg/ml，加 100μl/孔到96孔酶标板， 4 ℃放置过夜。
2第二天弃去包被液后，用 PBST洗涤 3次，每孔加入 150μl 1％ BSA 37 ℃封闭1小时。
3PBST洗涤 3次后，每孔加入 100 μl不同倍比稀释度的血清，并加入对照样品， 37 ℃孵育2小时。
4PBST洗涤5次后， 加入100μl稀释后的HRP标记的二抗，37℃孵育1小时。
5PBST洗涤5次后，显色剂显色 20min后，酶标仪上读取 A405吸收值。
注意事项
一般做倍比稀释进行检测，需要有相应的对照血清。
不同的显色系统对应不同的光吸收值。