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ELISA试剂盒检测关于特异性显色详细

发布时间:2019-08-07 15:31 |  点击次数:

ELISA试剂盒检测关于特异性显色详细

ELISA试剂盒对于间接ELISA标本一般都要进行稀释,如果加样不准就会造成误差,尤其当稀释倍数大时,很小的绝对误差,会导致较大的相对误差,使阴性(或弱阳性)标本呈阳性(或阴性)。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。目前,大部分血站都已使用全自动酶免加样系统处理标本,可较好地避免以上误差。
在ELISA中正确的洗涤是保证得到可重复结果的关健一步,ELISA试剂盒应引起操作者重视。无论是手工操作还是机器操作,得出不正确的结果常与不正确的洗涤有关,ELISA就是靠洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以消除残留在板孔中没能与固体抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。
每种试剂都有其最佳反应模式,其中温度和温育时间控制是重要因素。因孵育温度高,反应时间长,会造成整板本底高,阳性率高。温育一般用湿盒或水浴,ELISA试剂盒反应板不宜叠放,以保证各板温度都能迅速平衡,为避免蒸发,板上应加盖。
作为记录测定结果的仪器,酶标仪的性能稳定与否,决定结果的可靠度。首先酶标仪应定期进行保养,对滤光片要定期校正;其次酶标仪波长设置要正确,最好使用双波长,一个检测波长,一个参比波长,以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度差异造成的光干扰。此外,在用酶标仪读数时最好先擦试微孔板底部并压平板条。由于各种酶标仪性能有所不同,使用中应详细阅读说明书
ELISA试剂盒综上所述,尽管目前国际上以及我国有了部分标准血清或参比血清(血清盘),但是酶联免疫吸附技术目前在技术上尚未做到标准化。受方法学及技术条件的限制,在酶联免疫吸附测定中有时不可避免的会出现一定的非特异性,ELISA试剂盒我们可以通过以上措施把非特异性显色降至最低限底,从而提高检测的特异性,并得到更准确、可靠的实验结果。
酶联免疫吸附试验(ELISA)自问世以来,以其敏感性高,特异性强,操作简便、安全,开创了免疫学诊断的新纪元在临床诊断方面得到了广泛的应用。但是ELISA试剂盒在它的研究、生产及使用中常常会碰到非特异性显色问题,ELISA试剂盒特异性、检验标本中含酶标记物的干扰物,操作不当等因素都会导致这样的结果。本文就在实验过程中产生的一些原因及如何采取一些措施,消除非特异性显色作以分析。
风湿因子(RF)、黄疸等,类风湿因子是可作用于多种动物以及人IgGFc段的自身抗体,多数为IgM类,能充当抗原成分与固相及酶标抗体反应,从而呈现非特异性显色。
黄疸血标本中常含有内源性过氧化物酶,如用辣根过氧化物酶为标记物,就有可能产生非特异性显色。
常因样品采集、贮存、处理不当造成如样品溶血,被细菌污染,标本凝集不全等。溶血标本,红细胞溶解破裂,释放红素形成,而血红素中的铁卟啉是过氧化物酶的类似物,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP(辣根过氧化酶),ELISA试剂盒有国内报道酶免HBsAg试剂检测溶血标本时可造成假阳性。如在冰箱中保存过久,其中的IgG可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。因此,血标本在采集处理时应小心,在冰箱中保存不易过久。
ELISA试剂盒标本凝集不全时,血清中会残留部分纤维蛋白原,也易造成假阳性。