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ELISA试剂盒样本的大致处理方法

发布时间:2019-08-07 15:30 |  点击次数:

ELISA试剂盒样本的大致处理方法

一、液体样本
ELISA试剂盒液体样本处理准则:一切的液体样本,用无菌管搜集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),假如今后碰到其他的液体样本,也按这个办法,归入汇总表。
1、血清:用无菌管搜集,室温血液天然凝结10-20分钟,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),细心搜集上清,保存过程中如出现沉积,应再次离心。
2、血浆:应根据标本的要求挑选EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),细心搜集上清,保存过程中如有沉积构成,应该再次离心。
3、尿液:用无菌管搜集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清,保存过程中如有沉积构成,应再次离心。
4、胸腹水:用无菌管搜集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),细心搜集上清,保存过程中如有沉积构成,应再次离心。
5、脑脊液:用无菌管搜集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),细心搜集上清,保存过程中如有沉积构成,应再次离心。
6、唾液:用无菌管搜集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),细心搜集上清,保存过程中如有沉积构成,应再次离心。
7、细胞培育上清:检测排泄性的成份时,用无菌管搜集。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),细心搜集上清,保存过程中如有沉积构成,应再次离心。
8、牛奶:用无菌管搜集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),细心搜集上清,保存过程中如有沉积构成,应再次离心。
9、蜂蜜:用无菌管搜集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),细心搜集上清,保存过程中如有沉积构成,应再次离心。
10、全血:用含有抗凝剂的无菌管搜集,当即悄悄摇动,来回悄悄倒置数次,使血液和抗凝剂混匀,以防血液凝结。
二、ELISA试剂盒固体样本
固体样本处理准则:称取1g的固体样本,用9g的适宜缓冲液溶解,排泄蛋白可以直接离心取上清检测,细胞内的蛋白,要先搜集细胞,再用适宜办法破碎,离心取上清测验。
1、安排标本:切开标本后,称取1g安排,参加9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手艺或匀浆器将标本匀浆充沛。离心20分钟左右(2000-3000转/分),细心搜集上清。分装一份待检测,其他冷冻备用,保存过程中如有沉积构成,应再次离心。关于植物安排,欠好匀浆的话,就在液氮中充沛研磨;
2、细胞内蛋白样本
许多待测蛋白不是排泄蛋白,而是存在于细胞内的蛋白,这个时候,要先搜集细胞,洗刷洁净,再破碎细胞,离心取上清。
(1)培育的细胞
A、动物细胞:用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液,使细胞浓度到达100万/ml左右。经过重复冻融(假如重复冻融,破碎作用欠好,就选用超声波破碎),以使细胞损坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),细心搜集上清,保存过程中如有沉积构成,应再次离心。
B、植物细胞:用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液,使细胞浓度到达100万/ml左右,置于冰盒上,用超声破碎仪,设置破碎2s,冷却30s的办法,充沛破碎细胞,以使细胞损坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),细心搜集上清,保存过程中如有沉积构成,应再次离心。
(2)安排的细胞
切开标本后,称取1g安排,参加9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手艺或匀浆器将标本匀浆充沛。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS当心洗刷沉积的细胞三遍。再用上述的细胞破碎办法破碎细胞。
3、土壤:称取1g土壤,参加9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手艺将标本充沛混匀。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),细心搜集上清。分装一份待检测,其他冷冻备用,保存过程中如有沉积构成,应再次离心。假如是测排泄蛋白,直接取上清检测,测验细胞内蛋白,要破碎细胞。
4、咽拭子:参加2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解咽拭子头部,摇匀,用镊子取出咽拭子并挤干液体,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),细心搜集上清。分装一份待检测,其他冷冻备用,保存过程中如有沉积构成,应再次离心。假如是测排泄蛋白,直接取上清检测,测验细胞内蛋白,要破碎细胞。
5.植物标本中相关酶或蛋白的测定:(粗提取)
1、新鲜植物安排请在液氮中充沛研磨;
2、参加样品体积9倍的提取液(pH?7.4?PBS缓冲液),3、?请于4度,8000rpm,离心30分钟,取上清并暂时保存于4度待用。
三、ELISA试剂盒样本搜集注意事项
1、不能检测含NaN3的样品,因NaN3按捺辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2、标本收集后赶快进行试验,若不能立刻进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应防止重复冻融。
3、咱们罗列的是通用的样本处理办法,无法包括各种样本,关于一些特别样本,建议试验人员多参阅已宣布的文献,自行设计合理的样本处理办法。