上海钰博生物科技有限公司 品牌商

9 年

手机商铺

商家活跃:
产品热度:
品牌商

上海钰博生物科技有限公司

入驻年限:9 年

  • 联系人:

    顾磊

  • 所在地区:

    上海

  • 业务范围:

    细胞库 / 细胞培养、试剂、技术服务

  • 经营模式:

    生产厂商 经销商

在线沟通
推荐产品

pTrcHis A

品牌:Ybscience

¥800 - 1200

咨询

pMAL-p5x

品牌:Ybscience

¥800 - 1200

咨询

E选择素(SELE)检测试剂盒

品牌:钰博生物

¥900 - 1890

咨询

血红蛋白(HB)检测试剂盒

品牌: 上海钰博

¥1580 - 1980

咨询
查看全部产品

公司新闻/正文

何时该选择高保真聚合酶?

人阅读 发布时间:2022-06-14 13:20

在PCR实验中使用适当的聚合酶将确保最佳的产量和特异性,但市场上有那么多种聚合酶,如何选择,有时还真是个难题。厂家一般都会提供一个选择指南,列出每个产品的特异性、保真度、产量等。保真度是实验成功最关键的因素之一,不可不重视。

 

什么是聚合酶保真度?

 

DNA聚合酶的保真度是指准确复制目的模板的结果。具体来说,这涉及到多个步骤,包括读取模板链,选择正确的三磷酸核苷,并将此核苷酸插入3’引物末端的能力。为了高效区分正确和错误的核苷酸,一些DNA聚合酶具有3’到5’核酸外切酶活性。这种“校正”活性可切除不正确掺入的单核苷酸,并将其替换成正确的核苷酸。高保真PCR使用掺入错误率低且具有校正活性的DNA聚合酶,以保证目的DNA的忠实复制。

保真度在何时很重要?

在设计PCR实验时,你首先要考虑你的应用是否需要高保真聚合酶。如果实验结果依赖于正确的DNA序列(如克隆或测序),那么你就要尽量减少错配核苷酸的掺入。而对于普通PCR或菌落PCR,确定扩增子是否存在或质粒上是否带有插入片段,那高保真则大可不必。由于某些高保真聚合酶的强劲特性,一些研究人员在所有扩增中都使用它们。

如何测定保真度?

厂家通过各种不同的方法来确定DNA聚合酶的保真度。Thomas Kunkel曾介绍过一种方法,使用M13噬菌体的部分lacZα基因,通过宿主菌落颜色的变化来检查DNA合成中的错误。以Kunkel的分析为基础,Wayne Barnes则开发出一种分析,利用PCR来复制整个lacZ基因和两个抗药性基因的一部分,随后连接、克隆、转化和蓝白斑筛选。若lacZ基因存在错误,则破坏β-半乳糖苷酶活性,导致白斑的出现。通过这些实验方法,白斑克隆的比例可转化为错误掺入的数量。Sanger测序则提供了保真度的更直接读取,可检测所有突变。利用这种方法可确定聚合酶的整个突变谱。

何为高保真?

关于DNA聚合酶的高保真,目前还没有统一的定义。人们往往与Taq DNA聚合酶比较,来判断保真度的相对高低。例如,NEB(New England Biolabs)的科学家测定Taq聚合酶的错误率为2.7x10-4 ± 0.8x10-4,或每3700个碱基1个错误。这些数据表明,利用Taq以25个PCR循环扩增400 bp的片段,可能一半的克隆都带有错误。对于较大的片段如1 kb,每个克隆都可能带有不想要的突变。相比之下,NEB的Q5超保真聚合酶的错误率比Taq低100倍。根据这一数据,200个克隆中的199个将是正确的。

以上内容来自网络

上一篇

技术文章|LAMP、RPA、RCA等六种主流等温扩增技术原理介绍

下一篇

等温扩增 vs. PCR扩增,你pick谁?

更多资讯

询价列表

暂时没有已询价产品

快捷询价 发送名片
    当你希望让更多商家联系你时,可以勾选后发送询价,平台会将你的询价消息推荐给更多商家。
    yanxuan

    丁香通研选

    yanxuan

    丁香通小程序

    询价知情同意
    您知悉并同意,丁香通平台展示产品并非为平台自身产品,您发起询价或试用申请后,平台将会把您已提供或按要求提供的相关信息同步提供至所咨询的具体产品商家,由商家为您提供具体产品的价格咨询或产品试用注意事项及相关试用产品或完成相应购买,因此您知悉并授权平台将您的信息进行同步共享。您有权拒绝,但您知悉将无法参加询价或试用活动。