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Western blotting、凝胶的制备:
人阅读 发布时间:2017-04-25 13:01
Western blotting、凝胶的制备:
蛋白分子量 (KD) 分离胶浓度(%)
>100 8%
30~100 10%
10~30 12%
<10 15%
1、根据目的蛋白的分子量按比例配制分离胶,轻缓摇动混匀,切勿过于剧烈而混入过
多氧气。待凝胶溶液混合均匀,将凝胶溶液平缓注入灌胶装置的两层玻璃板中,在
液面上小心注入一层水,以阻止氧气接触凝胶溶液影响凝胶的聚合,保持水平,在
37℃恒温箱中静置约 1 小时,直至凝胶溶液完全聚合凝固。
2、按比例配制浓缩胶,轻缓摇动混匀,滤纸吸去已凝固分离胶上的水,平缓注入浓缩
胶溶液,小心插入梳子,并注意齿尖不可有气泡。在 37℃恒温箱中静置约 1h,直
至凝胶溶液完全聚合凝固,小心拔出梳子,准备上样。
蛋白分子量 (KD) 分离胶浓度(%)
>100 8%
30~100 10%
10~30 12%
<10 15%
1、根据目的蛋白的分子量按比例配制分离胶,轻缓摇动混匀,切勿过于剧烈而混入过
多氧气。待凝胶溶液混合均匀,将凝胶溶液平缓注入灌胶装置的两层玻璃板中,在
液面上小心注入一层水,以阻止氧气接触凝胶溶液影响凝胶的聚合,保持水平,在
37℃恒温箱中静置约 1 小时,直至凝胶溶液完全聚合凝固。
2、按比例配制浓缩胶,轻缓摇动混匀,滤纸吸去已凝固分离胶上的水,平缓注入浓缩
胶溶液,小心插入梳子,并注意齿尖不可有气泡。在 37℃恒温箱中静置约 1h,直
至凝胶溶液完全聚合凝固,小心拔出梳子,准备上样。