2018年，拓展质谱流式应用方向的文献频出。5月斯坦福大学Alex J. Kuo实验室将质谱流式研究引入表观修饰领域和衰老领域的热潮还未过去，8月瑞典皇家理工学院Petter Brodin实验室就实力抢镜，在Cell上发表其研究“Stereotypic Immune System Development in Newborn Children”，将质谱流式的热潮延续到新生儿免疫系统发育领域。接下来就让小编带着您一探究竟。

免疫系统的发育依赖于其暴露的环境因素。尤其是新生儿诞生后的前三个月暴露于什么样的环境中对于其免疫系统发育有重要的影响：肠道，皮肤，血管的微生物组成都在其中扮演了重要的角色。在此期间的免疫系统发育情况与后期过敏，哮喘，I型糖尿病等免疫相关疾病的发病都有相关性。因此，新生儿免疫系统发育一直以来都备受重视却又难有突破。其中很重要的一个原因是研究存在一个技术难点，那就是如何从新生儿如此少的血样中得到足够多的信息。在本文中，Petter Brodin实验室应用了质谱流式技术（每次可以检测40个通道以上）和ProSeek（Immunoassays，分析267种血浆蛋白）高通量的优势，克服这一难点。

该研究抽取了50个早产儿(＜30周)和50个足月新生儿(＞37周)出生时的脐带血及出生后1周、4周和12周的仅仅100ul血液，利用质谱流式技术就分析了58个常见免疫细胞亚群在人出生后不同时间点的发育情况，对比分析了早产儿和足月出生的新生儿之间的关系，并对影响免疫发育的因素进行了研究(图一)。同时结合immunoassays Proseek分析267种血浆蛋白表达情况，系统性呈现出新生儿出生后免疫系统适应性发育概况。结果显示：1 早产儿和足月新生儿在出生后免疫系统组成有着较大差异，之后，随着免疫系统的发育，两者的差异逐渐消失；2 免疫系统最初的发育遵循一个既定的路线；3 脐带血的免疫亚群组成对于新生儿的免疫系统无预示作用；4 与微生物的相互作用对免疫系统的发育有重要影响，肠道微生物的失调会阻碍发育进程。



图一:文章研究思路. 采用50个早产儿和50个足月新生儿出生时的脐带血及出生后的1周，4周和12周的100ul血液，利用质谱流式技术和Proseek对新生儿免疫系统发育以及环境对其的影响进行解析.

该研究对于质谱流式应用具有很大的推进作用——将样本量降低到仅仅100ul，而且在降低样本量的同时还可以维系PBMC分群得到常见免疫亚群中最为稀少的DC细胞亚群。其改良后的Protocol对于今后质谱流式的应用，尤其是样本量稀少的研究很有借鉴意义。该Protocol采用SmartTube或Cytodelics系列产品直接对血样进行裂红的方法代替常规Ficoll分离，降低了分离时所损失的细胞比例，提高了得率及活细胞比率。因此100ul血样中的PBMC就足以在保证罕见免疫亚群不丢失的情况下完成分群。在这里需要提出的一点是该Protocol的成功应用同时得益于其Panel设计。由于研究的是常见免疫亚群的发育情况，Panel中所涉及到的38种marker都是T细胞，B细胞，NK细胞，DC细胞等亚群激活，分化等分群常见的表面蛋白，而没有涉及到信号会受到SmartTube影响的趋化因子受体，磷酸化蛋白等抗原(图二)。用Immunoassay作为手段进行趋化因子等蛋白浓度研究